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Integrated Structural Biology Grenoble

Contacts relatifs à cet article / FIESCHI Franck / THEPAUT Michel

Plateforme Multi-étape de Purification de Protéines (MP3)

Présentation :

La plate-forme MP3 (Plateforme Multi-étape de Purification de Protéines), est un ensemble de 4 systèmes multidimensionnels de purification de protéines, dédiés à définir, optimiser ou automatiser un protocole de purification de protéines.
Grâce à ces systèmes, nous offrons notre aide pour tester différentes conditions de purification en parallèle (pH, sel, température, détergent, résine ...), ou pour automatiser un protocole en plusieurs étapes utilisant jusqu’à 5 colonnes de purification différentes. C’est particulièrement utile pour les échantillons instables, pour réduire votre temps d’immobilisation, pour augmenter la reproductibilité de vos productions de protéines, pour vos purifications de routine, ou pour accroître votre production et finalement vous livrer l’échantillon dont vous avez besoin.

Fonctionnement :

  • Chaque mardi, la plateforme est accessible pour des purifications standardisées (réserver une semaine à l’avance en contactant Michel Thépaut) :
Purification en deux étapes :
Affinité / gel filtration.
Purification en une étape  :
Simple affinité.




Remarque : la purification en une étape n’utilise pas réellement les possibilités de la plateforme, mais reste accessible en cas de besoin.
Demande :
Pour faire une demande, vous devez remplir ce formulaire :
Formulaire de demande de purification standard.
Ensuite vous devez le renvoyer par email à Michel Thépaut. Suite à la réception du formulaire, nous vous confirmerons la date ou vous proposerons une autre date si la plateforme n’est pas disponible pour la purification.
Colonnes disponibles :
Affinité : His-Tag 1 ou 5mL, IMAC 1 ou 5mL, StrepTag 5mL, GST 1 ou 5mL.
Gel filtration : Superdex75 125mL, Superdex200 125mL.
Affinité : His-Tag 1 ou 5mL, IMAC 1 ou 5mL, StrepTag 5mL, GST 1 ou 5mL.
Tampons à fournir :
- Tampon A (Équilibration / lavage) : 250mL.
- Tampon B (Élution) : 100mL.
- Tampon GF (Gel filtration) : 450mL.
- Tampon A (Équilibration / lavage) : 200mL.
- Tampon B (Élution) : 100mL.
Coût :
- Tarif 2D. - Tarif 1D.
Protocole :
Lundi avant 16h.
. Fournir les tampons.
Nuit de lundi à mardi.
. Équilibration affinité : tampon A.
. Équilibration gel filtration : tampon GF.
Mardi entre 9h et 10h
. Fournir l’échantillon.
Mardi
. Charge de l’échantillon.
. Lavage affinité : tampon A.
. Lavage affinité : x% tampon B (à déterminer par l’utilisateur).
. Élution affinité : 100% tampon B.
. Réinjection pic affinité (5 mL maximum).
. Élution gel filtration : tampon GF.
Mardi entre 9h et 10h
. Fournir les tampons et l’échantillon.
Mardi
. Équilibration affinité : tampon A.
. Charge de l’échantillon.
. Lavage affinité : tampon A.
. Élution affinité : gradient 0 à 100% tampon B et plateau à 100%.
Livrables :
- Produit de purification en plaque 96 puits.
- Chromatogramme.


  • La plateforme est aussi accessible pour des purifications à façon :
    Multi-dimentions :
    Jusqu’à 5 colonnes en série.
    Parallélisation :
    Jusqu’à 4 appareils en parallèle.
    Automatisation d’une purification à partir d’un protocole déjà établi pour un gain de reproductibilité et un gain de temps.
    Purification à plus grande échelle. Détermination de conditions de purification en faisant varier un paramètre (pH, force ionique, ion sur colonne IMAC, détergent, température...).
    Demande :
    Pour faire une demande, vous devez remplir ce formulaire :
    Formulaire de demande de purification à façon.
    Ensuite vous devez le renvoyer par email à Michel Thépaut. Suite à la réception du formulaire, nous vous proposerons une date de réunion pour établir précisément les conditions de votre expérience.
    Colonnes disponibles :
    His-Tag 1 ou 5mL, IMAC 1 ou 5mL, StrepTag 5mL, GST 1 ou 5mL, Heparine 5mL, CaptoQ 5mL, CaptoS 5mL, MonoQ 1mL, MonoS 1mL, Desalting 53mL, Superdex200 25mL, Superdex75 125mL, Superdex200 125mL.
    Coût :
    Le coût devra être discuté avec les responsables de la plateforme et dépendra du type d’expérience à réaliser et en particulier des colonnes utilisées (jusqu’à 5 colonnes), du nombre d’étapes de purification ou du type de détergent éventuellement utilisé. Ces options sont à préciser avec Michel Thépaut.
    Livrables :
    - Produit de purification en plaque 96 puits.
    - Chromatogramme.

    Équipement supplémentaire de la plate-forme :

    • Spectrophotomètre NanoDrop 2000C : accès en libre service, pour une première utilisation ou tout problème d’utilisation, contacter Michel Thépaut.

    Localisation :

    La plate-forme se situe à l’Institut de Biologie Structurale pièce 323 2ème étage.

    Certifications :

    • La plate-forme est certifiéee ISO 9001.
      Cette certification implique le suivi des équipements (Akta Xpress, colonnes, NanoDrop), une traçabilité optimale, et garantit les procédures et une rigueur expérimentale.
    • L’ensemble des plateforme IBS/PSB est également une plateforme de recherche en Science du Vivant labellisée IBiSA.

    Conditions générales :

    • La plateforme fonctionne selon un mode de service ou collaboratif.
      Service : Collaboration :
      Le coût des expériences est facturé à l’utilisateur et, en cas de publication, l’utilisateur s’engage à citer la plate-forme dans les remerciements et à communiquer la référence de l’article aux responsables de la plate-forme.
      Le coût des expériences n’est pas facturé, mais les responsables de la plate-forme seront associés aux publications résultantes du travail. Néanmoins, une participation aux consommables pourra être demandée (tampons, détergents, colonnes...).
      Phrase type à respecter pour les remerciements :
      This work used the platforms of the Grenoble Instruct centre (ISBG ; UMS 3518 CNRS-CEA-UGA-EMBL) with support from FRISBI (ANR-10-INBS-05-02) and GRAL (ANR-10-LABX-49-01) within the Grenoble Partnership for Structural Biology (PSB).


    • Seuls les échantillons biologiques non pathogènes sont acceptés. Arrêté du 18 juillet 1994 fixant la liste des agents biologiques pathogènes, modifié par les arrêtés du 17 avril 1997 et du 30 juin 1998. La liste des agents biologiques pathogènes est disponible sur le site internet de l’IPBS.
    • Les échantillons de type préparation de membranes (dans le cas de protéines membranaires), ou culot cellulaire (dans le cas de protéines solubles), ne sont acceptés que pour les utilisateurs externes et uniquement si la protéine est instable sous forme soluble. Dans ce cas, joindre obligatoirement un protocole précis d’extraction et de solubilisation.
    • Les données expérimentales seront conservées 1 an, elles pourront être transmises au client sur sa demande, une aide à l’interprétation des données sera réalisée si nécessaire.

    Enquête de satisfaction :

    Pour nous permettre de tenir compte de vos remarques et d’améliorer nos services, nous invitons les utilisateurs de la plate-forme à remplir l’enquête de satisfaction.