Contrôle qualité par microscopie électronique

Présentation

Le service de contrôle qualité par coloration négative permet de :

• vérifier l’homogénéité d’un échantillon (absence d’agrégats).
• déterminer, dans certains cas, le degré d’oligomérisation des protéines.
• analyse d’image et reconstruction 3D de complexes protéiques (collaboration).

Mots clés

Microscopie électronique, coloration négative, homogénéité.

Effectif dédié

• Daphna Fenel
• Christine Moriscot
• Guy Schoehn

Equipement

Microscope électronique FEI Tecnai12 120kV LaB6 avec 1 caméra GATAN Orius 1000

• Calibration du microscope : 1 fois par an
• Calibration de la caméra : 1 fois par semaine

Accessibilité et coûts

Académiques membres du PSB, autres académiques et industriels selon tarifs.

Comment nous contacter ?

Envoyer un courriel à : ibs-plateforme-em.contact ibs.fr
Une date vous sera envoyée par mail ainsi qu’une Demande d’Analyse à remplir et à apporter avec les échantillons.
Merci de prévoir un délai d’environ 2 semaines entre votre demande et la date proposée.

Echantillons

La taille minimale est de 100 kDa. Il est préférable d’éviter la présence de détergent et de glycérol.

La quantité minimum à fournir est de 30 microlitres d’échantillon à environ 0,2 mg/ml et 100 microlitres de tampon pour diluer. Suite à l’observation, les échantillons sont soit récupérés par le client, soit conservés 2 semaines au maximum, puis jetés.

Les échantillons doivent être purs .

Les échantillons doivent respecter le niveau de sécurité L1 ou L2 (à condition d’avoir été préalablement fixés) et être conformes à la déclaration OGM correspondante.

Les images obtenues par la plateforme peuvent être utilisées dans des communications techniques sauf avis contraire du client.

Procédure

Pour une première observation, au moins 2 colorants sont testés :

• Acétate Uranyle : 4,2 < pH Optimal < 4,5, très bon contraste, tampon phosphate à éviter, cross-link légèrement les protéines
• Sodium Silico Tungstate (SST) : 5 < pH Optimal < 8, adapté aux petites particules isolées
• Molybdate d’ammonium : 5 < pH Optimal < 7, adapté aux particules virales

Après préparation de la grille par coloration négative (technique de « flottaison » de carbone ou coloration sur grilles carbonées), 5 champs différents répartis sur la grille sont observés. Au minimum 10 photos sont prises pour représenter l’échantillon. Le grandissement peut varier de 10000x à 60000x suivant l’échantillon (sauf cas particulier).

Résultats

Après observation, l’expérimentateur envoie un bilan (via le serveur ftp du CEA ou sur le site intranet de l’IBS) contenant les photos les plus représentatives de l’échantillon avec un commentaire validé par le responsable de la plateforme. L’ensemble des images peut être mis à disposition sur demande.

Le délai d’obtention du bilan est de trois semaines ouvrées maximum à partir de la réception des échantillons (sauf dans le cas d’une panne de l’instrument).

Stockage des données

Les données sont stockées 3 ans.

Suivi valorisation

Si vous utilisez ces résultats (dans le cadre de la plateforme ou d’une collaboration) merci de rajouter :

• Dans vos remerciements :

« This work used the EM facilities at the Grenoble Instruct-ERIC Center (ISBG ; UAR 3518 CNRS CEA-UGA-EMBL) with support from the French Infrastructure for Integrated Structural Biology (FRISBI ; ANR-10-INSB-0005-02) and GRAL, a project of the University Grenoble Alpes graduate school (Ecoles Universitaires de Recherche) CBH-EUR-GS (ANR-17-EURE-0003) within the Grenoble Partnership for Structural Biology. The IBS Electron Microscope facility is supported by the Auvergne Rhône-Alpes Region, the Fonds Feder, the Fondation pour la Recherche Médicale and GIS-IBiSA. »

• Dans vos publications :
  FENEL Daphna1,2,3
  MORISCOT Christine1,2,3
  SCHOEHN Guy1,2,3
   

1CEA, Institut de Biologie Structurale Jean-Pierre Ebel, UMR5075 Grenoble France.
2CNRS, Institut de Biologie Structurale Jean-Pierre Ebel, UMR5075 Grenoble France.
3Université Grenoble Alpes, Institut de Biologie Structurale Jean-Pierre Ebel, UMR5075 Grenoble France.

Merci de préciser par mail les références de l’article dans lequel la plateforme est remerciée.
 

Localisation

IBS, rez de chaussée, groupe Microscopie Electronique et Méthodes.

Démarche qualité

La plateforme est certifiée ISO9001-NFX 50-900